关键词：ATCC 33291、空肠弯曲菌、食品安全检测、GB 4789.9、GB 4789.28、弯曲菌检验、培养基质控、WDCM 00005
一、菌株基本信息
- ATCC编号：33291
- 菌种名称：空肠弯曲菌空肠亚种（Campylobacter jejuni subsp. jejuni）
- 分离来源：人类粪便标本（美国科罗拉多州）
- 革兰氏反应：阴性（G-）
- 形态：细长弧形或S形杆菌，一端或两端有单鞭毛
- 生物安全等级：BSL-2
- 基因组测序：已完成全基因组测序
- 保藏机构：ATCC（美国典型培养物保藏中心）
- WDCM编号：WDCM 00005（工作数据微生物方法编号）
二、标准中的定位
ATCC 33291 是食品安全检测中弯曲菌检验的核心质控菌株，在以下标准中被明确指定：
2.1 中国标准
- GB/T 4789.9-2014：《食品安全国家标准 空肠弯曲菌检验》：ATCC 33291被指定为阳性对照菌株
- GB 4789.28-2013：《食品安全国家标准 培养基和试剂的质量要求》：弯曲菌选择性培养基质控指定该菌株
2.2 国际标准
- ISO 10272-1:2017：（食品中弯曲菌检测——第1部分：检测方法）：质控菌株参考
- ISO 10272-2:2017：（食品中弯曲菌计数——第2部分：计数方法）：质控菌株参考
2.3 培养基性能验证
依据GB 4789.28，ATCC 33291在以下培养基上的质控要求：
- 培养基：质控要求
- mCCDA（改良弯曲菌琼脂）：典型灰色/湿润扁平菌落生长
- Skirrow琼脂：典型菌落生长
- Karmali琼脂：典型菌落生长
- Bolton增菌液：42℃微需氧增菌后浑浊
- Preston增菌液：42℃微需氧增菌后浑浊
三、食品安全检测中的应用要点
3.1 GB/T 4789.9 检验流程中的质控
依据现行国家标准，ATCC 33291作为阳性对照的完整检验流程：
- 增菌：取25g样品+225mL Bolton增菌液，37℃培养4h后转42℃培养24~48h（微需氧条件）
- 分离：增菌液划线接种mCCDA琼脂，42℃微需氧培养48h
- 初步鉴定：典型菌落进行革兰染色、氧化酶试验、运动性观察
- 生化确认：马尿酸水解试验（空肠弯曲菌阳性）、PCR确认
3.2 微需氧培养条件
空肠弯曲菌严格要求微需氧环境——这是操作中最关键的环节：
- 气体组成：5% O₂、10% CO₂、85% N₂
- 温度：42℃（空肠弯曲菌选择性增菌温度，区别于结肠弯曲菌的25℃生长阴性）
- 培养时间：48h
微需氧条件获取方法：
- 微需氧产气袋系统（最便捷）
- 三气培养箱（可精确控制气体比例）
- 厌氧罐+混合气体置换
3.3 马尿酸水解试验
ATCC 33291（空肠弯曲菌）的马尿酸水解试验阳性，这是区分空肠弯曲菌与结肠弯曲菌的关键指标：
- 空肠弯曲菌：马尿酸水解阳性
- 结肠弯曲菌：马尿酸水解阴性
3.4 运动性观察
在湿片显微镜下，ATCC 33291呈现特征性的"投镖"式运动（darting motility）——快速、直线冲刺后突然改变方向，由单极鞭毛驱动。
3.5 PCR检测质控
在实时荧光PCR快速检测中，ATCC 33291作为阳性对照：
- 靶基因：hipO（马尿酸酶基因）、mapA（空肠弯曲菌特异性基因）、ceuE（铁摄取基因）
- 阴性对照使用结肠弯曲菌ATCC 43478或无菌水
四、培养与保藏技术要点
4.1 常规培养条件
- 培养基：mCCDA、Skirrow琼脂、Bolton增菌液
- 培养温度：42℃（选择性增菌），37℃（非选择性增菌预培养4h）
- 培养时间：48h
- 气体条件：微需氧（5% O₂、10% CO₂、85% N₂）
4.2 菌种保藏
- 短期保藏：Bolton肉汤或含血琼脂斜面，2~8℃，每周传代1次，微需氧条件
- 长期保藏：20%甘油BHI肉汤冻存，-80℃或更低
- 冷冻干燥保藏：ATCC原代冻干粉开封后立即复苏
- 重要提醒：弯曲菌对干燥、低温、有氧环境极其敏感，是最难保藏的菌属之一，务必减少室温暴露时间
4.3 形态鉴别要点
- mCCDA琼脂上菌落灰色、湿润、扁平、边缘不规则
- 革兰染色阴性弧形或S形杆菌（S形典型）
- 一端或两端单鞭毛，"投镖"运动
- 氧化酶阳性
- 马尿酸水解阳性（空肠弯曲菌特征）
- 25℃不生长、42℃生长（温度耐受性鉴别）
五、常见问题与排障
- 微需氧培养不生长：氧气浓度偏高（>10%）
- 42℃培养不长：温度偏差或增菌时间不够
- 革兰染色不典型：染色操作不当或菌龄偏老
- 马尿酸水解假阴性：反应时间不足或试剂失效
- 保藏后复苏失败：弯曲菌对冻融敏感
六、权威数据来源
- ATCC官方目录：https://www.atcc.org/products/33291
- GB/T 4789.9-2014《食品安全国家标准 空肠弯曲菌检验》
- GB 4789.28-2013《食品安全国家标准 培养基和试剂的质量要求》
- ISO 10272-1:2017 & ISO 10272-2:2017
- Microbiologics Campylobacter jejuni ATCC 33291 KWIK-STIK
- WDCM 00005 Work Data Microorganism Methods
关于我们
杭州康氧医疗器械有限公司专注于ATCC标准菌株、ATCC细胞、DSMZ标准菌株、CMCC菌种、CICC菌种等各类微生物标准菌株的供应。我们的菌株直接源自ATCC官方保藏中心，特性稳定、数据权威可溯源，广泛应用于制药、食品、化妆品、环保及科研领域的质量控制与检测验证。
- 官网：www.kystrains.com
免责声明
本文内容基于ATCC官方数据、国家标准GB 4789系列及ISO标准整理，仅供专业技术交流参考，不构成任何商业推荐或采购建议。菌株的储存、使用及操作应严格遵守实验室生物安全规范及相关法规要求。空肠弯曲菌操作须在微需氧条件下进行，操作不当将直接影响菌株活性及检测结果。具体产品信息请以ATCC官方网站（www.atcc.org）发布的最新资料为准。