SPR、BLI 是无标记分子互作动力学检测常用设备，能够实时记录分子结合、解离全过程，输出 Ka、Kd、KD 等关键参数，广泛用于抗体配对筛选、蛋白互作分析、小分子候选分子评估。实验过程常出现曲线拟合报错、亲和力数值失真、基线持续漂移、平行样本重复性差等问题，本文结合一线实操经验，梳理全流程干扰因素与标准化改良方法。

一、两种设备运行机制不同，干扰类型存在区别

SPR 为流通式检测，容易产生传质阻滞效应，再生力度把控不当会造成基线漂移，多通道同步检测还会受液路残留影响；BLI 依靠传感器浸泡样本反应，解离阶段脱落分子易二次吸附，亲和力检测结果会偏离真实水平，长期检测基线波动更明显。 二者存在四类通用干扰：多价分子带来假性亲和力、固相配体负载不合理、样本基质杂质吸附、拟合模型选用不匹配。

二、配体固定环节把控，规避基础数据偏差

固相蛋白负载是决定数据可靠性的前置步骤。SPR 芯片固定信号建议控制在 10–50 RU，负载过高会出现空间位阻、诱发多点结合；负载过低则信号微弱，无法完成精准拟合。 优先采用生物素定点偶联固定蛋白，保障蛋白识别区域正常暴露；固定完成后设置空白对照扣除背景，负载超标芯片建议重新制备传感表面。

三、多价分子易造成数值误判，配套改良方案

完整抗体、多聚蛋白等多价分子会在传感层形成多点吸附，减缓解离速率，出现表观亲和力虚高。 可将抗体切割为 Fab 单价片段上机，同步降低固相蛋白固定密度；针对多价结合特征样本，更换双位点拟合模型，搭配其他实验交叉核对检测结果。

四、缓冲液与样本预处理，降低曲线背景噪音

血清、细胞上清等复杂样本含有大量杂蛋白，易吸附芯片与传感层抬高基线。样本上机前离心过滤去除沉淀，基质复杂样本适度稀释处理。 常规检测使用添加少量吐温 20 的 PBS 缓冲液，样本与运行缓冲液成分保持一致，避免折射率差异引发基线剧烈跳动。

五、匹配对应拟合模型，产出有效动力学数据

不少实验人员统一使用 1:1 朗缪尔模型处理全部曲线，多价互作、蛋白构象变化样本会出现拟合残差偏移。单价可逆分子适配 1:1 模型，多点结合样本更换对应拟合模式，全部浓度梯度数据统一全局拟合。无明显解离信号的分子，不强行拟合曲线，改用间接检测方式分析。

完整把控传感表面制备、样本前处理、实验参数适配与数据解析全流程，能够减少基线漂移、拟合失败、亲和力失真等问题，得到稳定可靠的动力学数据。卡梅德生物可以提供 SPR/BLI 实验方案设计、分子亲和力检测、动力学数据拟合分析相关技术服务，降低科研人员实验试错成本。